Sintesi tal-Peptidi Twil|Personalizzazzjoni tal-Peptidi tal-Katina Twila|Sinteżi tal-Peptidi Diffiċli|Peptidi aktar minn 50mer|Xjenza-Peptide
Meta Deskrizzjoni
Għandek bżonn peptide twil b'aktar minn 50 aċidu amminiku? Xjenza-Is-servizz ta 'Sinteżi ta' Peptide twila ta 'Peptide ikopri 50-189 aċidu amminiku, bi strateġija ta' sinteżi segmentata, tegħleb il-problemi ta 'aggregazzjoni idrofobika u effiċjenza baxxa ta' sinteżi, eċċ. 20 snin ta 'esperjenza u twassil stabbli. Merħba tikkuntattjana.
Peptidi twal: Iktar ma jkunu itwal, aktar inkwiet jikkawżaw
Għaliex huma diffiċli li jsiru peptidi twal?
Kull min għamel sintesi tal-peptidi jaf li l-problema tqum meta l-katina tal-peptidi tkun twila: fi żmien 20 aċidu amminiku, il-biċċa l-kbira tal-kumpaniji jistgħu jagħmlu dan. Meta niġu għal aktar minn 40 aċidu amminiku, nibdew nagħżlu s-sekwenza. F'60 aċidu amminiku jew aktar, in-numru ta 'kumpaniji li jistgħu jieħdu f'idejhom jitnaqqas bin-nofs. Meta niġu għal aktar minn 100 aċidu amminiku, m'hemmx ħafna kumpaniji li DARE jagħmlu dan.
Għaliex? Minħabba li Long Peptide Synthesis tiltaqa 'ma' diversi nases:
L-effiċjenza tas-sinteżi tonqos: kull estensjoni ta 'aċidu amminiku, ir-rendiment se jiġi skontat darba. 30 peptide ta' aċidu amminiku, kull pass ta 'rendiment ta' 99%, ir-rendiment finali għadu 74%; 60 aċidu amminiku, kull pass għadu 99%, ir-rendiment finali huwa biss 55%. Fil-fatt, ir-rendiment ta 'ħafna passi ma jistax jilħaq 99%.
Aggregazzjoni idrofobika: Meta jkun hemm ħafna aċidi amminiċi idrofobiċi f'peptide twil, il-katina tal-peptidi tibda "tiġbor" fuq ir-reżina, u l-aċidi amminiċi warajha ma jistgħux jidħlu.
Diffikultà fil-purifikazzjoni: il-ħin ta 'żamma ta' peptidi twal u impuritajiet huma qrib wisq ta 'xulxin għal qatgħa nadifa.
Solubilità fqira: Meta tinkiseb il-peptide, ma tistax tinħall, għalhekk l-esperiment ma jistax isir.
Ilna f’dawn il-ħofor qabel, u nafu kif nimxu madwarhom.

Dak li nistgħu nagħmlu
1. Tul: 50-189 Amino Aċidi
|
medda ta 'tul |
Diffikultà |
Għamilna sitwazzjonijiet fejn |
|
50-80 aa |
Upper middle class |
Routine program with >90% rata ta 'suċċess |
|
80-120 aa |
Għoli |
Ħtieġa strateġija ta 'sinteżi segmentata, esperjenza biżżejjed |
|
120-150 aa |
Għolja ħafna |
Għamilt ħafna minnhom, sa 150. |
|
150-189 aa |
Għolja estremament |
Livell ta' sfida, bi stejjer ta' suċċess |
2. Strateġija ta 'sinteżi segmentata
L-aktar mod effettiv biex tittratta l-peptidi twal huwa li tissegmentahom:
Għażla tas-segment: Aqta 'l-peptide twil f'2-4 segmenti ta' 30-60 aċidu amminiku kull wieħed. Il-punt tal-qatgħa għandu jkun jinsab fil-pożizzjoni fejn id-diffikultà tas-sintesi hija baxxa, pereżempju, tevita r-reġjun idrofobiku kontinwu.
Sinteżi tal-frammenti: Kull framment huwa sintetizzat u purifikat individwalment għal purità għolja biżżejjed.
Splicing tal-frammenti: tgħaqqad frammenti flimkien f'soluzzjoni jew fuq reżina. Il-metodu li jgħaqqad jista 'jkun jew kimiku naturali jew enżimatiku.
Tiwi: Jekk il-peptide għandu bond disulfide, għandu jintwew fil-konformazzjoni korretta wara t-twaħħil.
3. Purità: Skont ir-Rekwiżiti Sperimentali
|
Livell ta 'purità |
Xenarji Applikabbli |
|
Pur konvenzjonali (85-95%) |
Tgħaqqad sperimentali, screening primarju attiv |
|
Purità għolja (95-98%) |
esperimenti ċellulari, validazzjoni funzjonali |
|
Ultrapure (>98%) |
Studji strutturali, kristallografija |
Kull peptide twil huwa akkumpanjat minn rapport HPLC u MS, li jagħmel id-dejta tal-purità trasparenti.
4. Modifiki: peptidi twal jistgħu wkoll iżidu l-funzjoni
Tikkettar fluworexxenti: FITC, TAMRA, trid tara fejn tmur il-peptide twil.
Bijotina:Iġbed-l isfel jew ittestja.
Tikkettar tal-isotopi: għall-kwantifikazzjoni tal-NMR jew tal-ispettrometrija tal-massa.
Fosforilazzjoni/glikosilazzjoni: jimitaw modifiki ta' wara-traduzzjoni.
Għaliex jiġu għandna għal Long Peptide Synthesis?
1. Ilna nagħmlu dan għal 20 sena
Long Peptide Synthesis mhix xi ħaġa li kulħadd jista 'jagħmel. Matul is-snin, immaniġġajna ħafna peptidi twal: frammenti ta 'proteini transmembrana, peptidi tal-fużjoni virali, proteini amilojdi, peptidi antimikrobiċi, eċċ Għandna idea tajba ta' liema sekwenzi huma faċli biex jinġabru u liema kundizzjonijiet jistgħu jiffrankawhom. Jekk tiġi għandna għal Long Peptide Synthesis, għall-inqas ma jkollokx għalfejn tgħaddi l-ħofra mill-bidu.
2. Sinteżi frazzjonali: mhux biss qtugħ f'biċċiet
Is-segmentazzjoni tinstema' sempliċi, iżda fejn taqta', kemm hu twil kull segment, u kif tgħaqqadhom huma kollha importanti. Għandna diversi prinċipji:
Aqta 'f'żona idrofilika: Evita li taqta' fil-qalba idrofobika, inkella s-segmenti jinġabru waħedhom.
Ibbilanċja t-tul tal-frammenti: Tagħmelx segment wieħed partikolarment diffiċli biex tagħmel u segmenti oħra partikolarment faċli. 3.
Għażla tal-punt ta' konnessjoni: Konnessjonijiet kimiċi naturali jeħtieġu thioester fit-terminal C-u Cys fit-terminal N-, li għandhom ikunu ddisinjati minn qabel.
3. Peptidi idrofobiċi: sistema ta 'solvent speċjali.
Xi peptidi twal huma tant idrofobiċi li ma jistgħux jiġu solvuti b'solventi konvenzjonali, għalhekk se jinġabru flimkien fuq ir-reżina meta jiġu sintetizzati. Għandna sistema ta 'solvent speċjali u addittivi biex inżommu l-katina tal-peptidi tiġbid matul il-proċess ta' sinteżi, sabiex l-aċidi amminiċi li ġejjin ikunu jistgħu jidħlu.
4. Kontroll tal-kwalità: data f'kull pass
Il-kontroll tal-kwalità tal-peptidi twal huwa aktar kumpless minn dak tal-peptidi qosra:
Kontroll tal-kwalità tas-sustanzi intermedji: wara li tissintetizza kull framment, kejjel il-purità u l-piż molekulari l-ewwel, u mbagħad kompli għall-pass li jmiss wara li tgħaddi mit-test.
Monitoraġġ tal-proċess ta 'splicing: Ipprova r-reazzjoni tal-konnessjoni u kejjel l-MS biex tara l-effiċjenza tal-konnessjoni.
Spezzjoni tal-prodott finali: HPLC għall-purità, MS għall-piż molekulari, MS/MS għall-korrettezza tas-sekwenza (mhux obbligatorju).
Test tas-solubilità: Ipprovdi solventi rakkomandati u metodi ta 'solubilizzazzjoni, sabiex ma jkollokx peptidi li ma jinħallx.
Meta tagħmel Long Peptide Synthesis, id-dejta titkellem waħedha u kull pass huwa traċċabbli.
5. Minn milligrammi sa mitt milligramma, it-triq kollha sa l-aħħar
Milligrammi għall-fażi ta 'screening, għaxar milligrammi għall-fażi ta' validazzjoni, mitt milligramma għall-istudju strutturali - nistgħu nieħdu dan kollu. L-istess proġett, l-istess kontroparti, l-ebda ħtieġa ta' armonizzazzjoni mill-ġdid.
Għal xiex Jistgħu Jintużaw Peptidi twal?
|
Oqsma ta' riċerka |
Użi Komuni |
Għamilna sitwazzjonijiet fejn |
|
proteini tal-membrana |
frammenti transmembrana, loops extraċellulari |
Peptide twil b'reġjuni transmembrana multipli, idrofobiku ħafna |
|
proteini virali |
Peptidi ta' fużjoni, oqsma li jorbtu-riċetturi |
Framment ġdid tal-proteina tal-koronavirus S, madwar 100aa |
|
Amilojde |
A , -synuclein |
42aa hija n-norma. Saru dawk itwal |
|
Peptidi antimikrobiċi |
Peptidi antimikrobiċi ta'-katina twila |
Xi peptidi antimikrobiċi naturali huma biss 40-60aa |
|
Ċitokini |
jissimulaw iż-żona attiva |
50-80aa, b'bonds disulfide |
|
bijoloġija strutturali |
NMR, kristallografija |
Isotopically labeled peptide, purity >98%. |
Kunsinna u kontroll tal-kwalità
- Kunsinna: Trab lajofilizzat, tubi ċentrifugi jew kunjetti, protetti bin-nitroġenu.
- Dokumenti ta' akkumpanjament:COA (profil HPLC + profil MS), MS/MS (konferma tas-sekwenza mhux obbligatorja), rapport ta' sinteżi (proċess ta' segmentazzjoni u splicing).
- Testijiet fakultattivi: kontenut ta 'peptidi, endotossina, umdità, kompożizzjoni ta' aċidu amminiku, test tas-solubilità.
- Ippakkjar personalizzat: porzjonijiet u mmarkar skond il-ħtiġijiet tiegħek.
- Kull prodott Long Peptide Synthesis huwa doppju-iċċekkjat biex jiġi żgurat li s-sekwenza hija korretta u l-purità tkun sa standard qabel ma tintbagħat.



Tliet każi tal-{0}}ħajja reali
Każ 1: Programm ta' proteini tal-membrana f'istitut ta' riċerka
The customer needs a 85aa transmembrane peptide for structural study. This peptide has 60% of hydrophobic amino acids, so many companies could not make it. We used segmental synthesis, cut into three segments, each segment is about 30aa, purified and then liquid-phase ligated. The final purity of the peptide is >95%, u l-klijent ltqajna u għamel NMR.
Każ 2: Programm ta' proteini virali ta' kumpanija farmaċewtika multinazzjonali
A 110aa viral fusion peptide with two pairs of disulfide bonds was required for inhibitor screening. We designed a segmented synthesis strategy to synthesize three linear fragments first, which were joined and then oxidized to form disulfide bonds. The final product was delivered with >Purità ta '90%, bonds ta' disulfide paired b'mod korrett, u għadda mill-verifika tal-attività.
Każ 3: Riċerka tal-amilojde f'università nazzjonali
The customer needs a 70aa fragment of alpha-synuclein for the study of aggregation mechanism. This peptide is easy to form fibers and always blocked the column during purification. We optimized the mobile phase conditions, added a small amount of organic solvent, and finally obtained a product with purity >95%, u l-klijent wettaq b'suċċess esperimenti ThT.
Titkellem dwar il-bżonnijiet twal tiegħek tal-peptidi?
Kemm jekk trid peptide transmembrane 80aa jew proteina virali 150aa, tista 'tkellem magħna. Jekk tistaqsi lil Science-Peptide biex tagħmel Long Peptide Synthesis, għallinqas m'għandekx għalfejn tipprova waħda waħda.
Għandi bżonn li tgħidli:
Sekwenza tal-peptidi (jew informazzjoni fil-mira)
Kemm (milligrammi)
rekwiżiti ta’ purità
m'għandhom l-ebda bonds disulfide jew modifiki oħra
Meta tridu?
Agħtik valutazzjoni tal-fattibilità u kkwota fi żmien 24 siegħa.