Sinteżi Cyclic Peptide|Peptidi ċikliċi tad-dwana|Peptidi Stapled|Ċiklizzazzjoni tal-Katina tal-Ġnub|Xjenza-Peptide
Meta Deskrizzjoni
Għandek bżonn peptidi ċikliċi diffiċli? Xjenza-Is-servizz tas-Sinteżi tal-Peptide Ċiklika ta' Peptide ikopri l-ewwel u l-aħħar ċiklizzazzjoni, ċiklizzazzjoni tal-katina tal-ġenb, peptide stejpjat, pairing multipli ta' bonds disulfide. 20 snin ta' esperjenza f'peptidi ċikliċi kumplessi, twassil stabbli. Nitolbok li tħossok liberu li tikkuntattjana.
Peptide ċikliku: verżjoni aġġornata tal-peptide lineari
Għaliex Peptidi ċikliċi?
Kull min ħadem mal-peptidi jaf li l-peptidi lineari jaħdmu tajjeb, iżda xi drabi ma jaħdmux daqshekk tajjeb - huma maqtugħin mill-enzimi fi żmien qasir minn meta jidħlu fil-ġisem, jew ma jorbtux sewwa biżżejjed mas-sit fil-mira. Li tagħmel peptidi lineari f'linji huwa l-aktar mod dirett biex issolvi dawn il-problemi.
Il-peptidi ċikliċi għandhom konformazzjoni aktar fissa u mhumiex faċli biex jinqatgħu minn proteases; meta huma kkombinati mal-mira, minħabba li l-istruttura ġiet imsakkra, it-telf ta 'entropija huwa żgħir, u l-forza li torbot hija aktar b'saħħitha. Ħafna peptidi attivi naturali huma ċikliċi fin-natura, bħal peptidi antibatteriċi u immunosoppressanti, li għalihom l-evoluzzjoni ilha għażlet id-direzzjoni għalina.
Madankollu, id-diffikultà tas-Sinteżi Cyclic Peptide hija tabilħaqq ħafna ogħla minn dik tal-peptidi lineari. Aħna intensifikati fuq dawn il-potholes qabel, u nafu kif tikseb madwarhom, bħall-effiċjenza baxxa tal-formazzjoni taċ-ċirku, ħafna reazzjonijiet sekondarji, u l-impossibbiltà li tirkupra l-purifikazzjoni.
X'nistgħu nagħmlu dwar tisfir?
1. Ċirkularizzazzjoni: Jiddependi fuq Dak li Tixtieq
|
Tip ta 'ċiklizzazzjoni |
Kif |
Meta tużah |
|
L-ewwel u l-aħħar annularizzazzjoni |
N-tarf u C-tarf huma konnessi direttament |
Li jimitaw peptidi ċikliċi naturali, peptidi qosra huma komunement użati |
|
ċiklizzazzjoni-katina tal-ġenb |
ċiklizzazzjoni permezz tal-ktajjen tal-ġenb Lys, Glu, u Asp |
Trid tħalli t-tarf għat-tirqim, jew iċ-ċirku huwa akbar |
|
ċiklizzazzjoni tal-bonds tad-disulfide |
Il-formazzjoni ta 'rabta disulfide bejn Cys |
Peptidi antimikrobiċi, peptidi tossini, l-aktar naturali |
|
Peptidi stapled |
Il-katina tal-idrokarburi tippernja l-helix |
Stabbilizzazzjoni tal-alfa-helix u titjib tal-penetrazzjoni tal-membrana |
|
Ċiklizzazzjoni tal-etere tal-kubrit |
Twaħħil mhux-naturali, aktar reżistenti għad-degradazzjoni enżimatika |
Biex issir droga, teħtieġ stabbiltà metabolika għolja |
Skont l-istruttura fil-mira tiegħek, aħna niddeterminaw liema ċiklizzazzjoni hija l-aktar xierqa. L-ewwel pass fis-Sinteżi tal-Peptidi Ċikliċi huwa li tagħżel il-metodu ta 'ċiklizzazzjoni t-tajjeb.
2. Rabtiet disulfide: saru minn wieħed sa erba 'pari
Bond disulfide par wieħed: operazzjoni ta 'rutina, rata ta' suċċess aktar minn 95%.
Żewġ pari ta 'bonds ta' disulfide: jeħtieġ li tikkontrolla l-ordni ta 'tqabbil, għandna strateġija ta' protezzjoni ortogonali.
Tliet pari jew aktar: Sa erba' pari, miftuħa u mqabbla waħda waħda.
3. Tul: 2-60 aċidu amminiku wara ċiklizzazzjoni
L-itwal il-peptide ċikliku, l-aħjar, l-effiċjenza taċ-ċiklizzazzjoni itwal se tkun 'l isfel. L-itwal peptide ċikliku li qatt għamilna huwa 60 aċidu amminiku, u sintetizzajna l-framment lineari f'segmenti l-ewwel, u mbagħad ċiklizzawh f'fażi likwida.
4. Purità: skond l-istadju sperimentali
|
Livell ta 'purità |
Xenarji xierqa |
|
Mhux raffinat (70-85%) |
Screening inizjali, ara jekk hux attiv l-ewwel, iffranka l-flus |
|
Pur konvenzjonali (85-95%) |
Esperimenti ċellulari, flimkien ma 'esperimenti li |
|
Purità għolja (95-98%) |
Esperimenti fuq l-annimali, validazzjoni funzjonali |
|
Ultrapure (>98%) |
Struttura tal-kristall, NMR |
Kull peptide ċikliku huwa akkumpanjat minn rapporti HPLC u MS, u l-effiċjenza taċ-ċiklizzazzjoni, il-peptide lineari residwu u l-purità huma ttikkettjati b'mod ċar.
5. Iċ-ċirku jista 'wkoll jiġi modifikat
Tikkettar fluworexxenti: FITC, TAMRA, Cy5, trid tara fejn tmur il-peptide ċikliku.
Bijotina:Iġbed-l isfel jew ittestja.
PEGylation:Twil ta' half-life in vivo.
D-aċidi amminiċi tat-tip: Ittejjeb l-istabbiltà.
Għaliex jiġu għandna għal Cyclic Peptide Synthesis?
1. Ilna nagħmlu dan ix-xogħol għal 20 sena
Is-Sinteżi tal-Peptidi Ċikliċi mhix biss kwistjoni li titfa 'peptide lineari f'kunjett ta' reazzjoni u tħawwadha. Jekk il-kundizzjonijiet taċ-ċiklizzazzjoni huma xi ftit 'l barra, jew ir-rendiment ikun tant baxx li se tiddubita minn ħajtek, jew ikun hemm ħafna minn-prodotti li ma jistgħux jiġu separati.
Iċ-ċiklizzazzjoni ta 'peptidi transmembrana, conotoxin bi tliet pari ta' bonds disulfide, peptidi helical stapled - aħna ttrattati ħafna peptidi ta 'ċiklizzazzjoni diffiċli matul is-snin. Għandna idea tajba ta' liema sekwenzi huma faċli biex jiġu polimerizzati u liema kundizzjonijiet jistgħu jsalvawhom. Jekk tiġi għandna għal Cyclic Peptide Synthesis, għall-inqas ma jkollokx għalfejn tgħaddi l-ħofra mill-bidu.
2. Strateġiji ta 'ċiklizzazzjoni: fażi solida jew fażi likwida, l-għażla hija tiegħek
Solidu -ċiklizzazzjoni tal-fażi: formazzjoni diretta taċ-ċirku fuq ir-reżina, adattata għal peptidi qosra u ċiklizzazzjoni tal-katina tal-ġenb, faċli biex topera, adattata għal throughput għoli.
Ċiklizzazzjoni tal-fażi likwida: purifikazzjoni ta 'peptidi lineari segwita minn ċiklizzazzjoni, adattata għal peptidi twal jew meta jkunu meħtieġa kundizzjonijiet dilwiti biex tiġi evitata l-polimerizzazzjoni.
Metodu ta' żewġ-passi: sinteżi ta'-fażi solida ta' peptide lineari, purifikazzjoni, u mbagħad ċiklizzazzjoni ta'-fażi likwida biex tibbilanċja l-purità u r-rendiment.
M'hemm l-ebda approċċ ta'-daqs-li jgħodd-kull wieħed. Aħna ser nagħżlu l-aktar rotta affidabbli bbażata fuq is-sekwenza tiegħek u l-metodu ta 'ċiklizzazzjoni.
3. Tqabbil tal-bonds tad-disulfid: l-ebda guessing, l-ebda strateġija
L-iktar ħaġa diffiċli dwar pari multipli ta 'bonds ta' disulfide hija l-ordni ta 'tqabbil. Għandna strateġija ta 'protezzjoni ortogonali, li tista' tiftaħ u tgħaqqadhom waħda waħda biex tiżgura li l-bonds tad-disulfide huma konnessi fil-post it-tajjeb.
4. Kontroll tal-kwalità: kull peptide ċikliku huwa dokumentat
MS: L-ewwel, ara jekk il-piż molekulari huwiex korrett (18 jew aktar inqas minn lineari wara ċ-ċiklizzazzjoni, skont il-metodu tal-formazzjoni taċ-ċirku).
HPLC: ħares lejn il-purità, u ħares ukoll lejn kemm peptidi lineari mhumiex looped.
Fakultattiv: kontenut ta 'peptide, endotossina, umdità.
Meta tagħmel Cyclic Peptide Synthesis, id-dejta titkellem waħedha, l-ebda falsità.
5. Minn kwantitajiet żgħar għal kbar, mingħajr ma jinbidlu l-fornituri
Milligrammi fil-fażi ta 'screening, għaxar milligrammi fil-fażi ta' validazzjoni, mitt milligramma għal gramma fil-fażi preklinika - nistgħu nagħmlu dan kollu. L-istess proġett, l-istess kontroparti, l-ebda ħtieġa ta' armonizzazzjoni mill-ġdid.
Għal xiex Jistgħu Jintużaw Peptidi ċikliċi?
|
Direzzjonijiet tar-riċerka |
Użi Komuni |
Approċċ taċ-ċiklizzazzjoni |
|
Peptidi antimikrobiċi |
Stabbiltà mtejba, inqas suxxettibbli għal qsim enżimatiku |
disulfide bond cyclization, ċiklizzazzjoni minn ras-għa-denb |
|
Peptidi antitumorali |
Irbit imtejjeb mal-mira |
peptidi stapled, ċiklizzazzjoni tal-katina tal-ġenb |
|
immunosoppressjoni |
analogi taċ-ċiklosporina |
L-ewwel u l-aħħar annularizzazzjoni |
|
peptidi-penetranti taċ-ċelluli |
Titjib tal-ħila li jidħlu ċelloli li |
Peptidi stapled |
|
riċerka dwar it-tossini |
Conotoxin, peptidi tal-velenu tas-serp |
Pari multipli ta 'bonds disulfide |
|
ormoni peptidi |
half-ħajja mtawla |
ċiklizzazzjoni-katina tal-ġenb |
|
reaġenti dijanjostiċi |
Sonda taċ-ċirku, speċifiċità tajba |
jistgħu jiġu ttikkettjati b'markaturi tal-bijotina jew fluworexxenti |
Kunsinna u kontroll tal-kwalità
- Kunsinna: Trab lajofilizzat, tubi ċentrifugi jew kunjetti, protetti bin-nitroġenu.
- Dokumenti ta' akkumpanjament:COA (profil HPLC + spettru MS), MS/MS (biex tikkonferma t-tqabbil tas-sit taċ-ċiklizzazzjoni/disulfide bond).
- Testijiet fakultattivi: kontenut ta 'peptidi, endotossina, umdità, kompożizzjoni ta' aċidu amminiku.
- Ippakkjar personalizzat: porzjonijiet u mmarkar skond il-ħtiġijiet tiegħek.
- Kull prodott Cyclic Peptide Synthesis huwa doppju-iċċekkjat biex jiżgura ċiklizzazzjoni korretta u purità qabel il-ġarr.
Tliet stejjer veri
Każ 1: Programm ta' peptidi antimikrobiċi ta' istitut ta' riċerka
The client wanted a cyclic peptide containing two pairs of disulfide bonds, 28 amino acids, of natural origin. We designed an orthogonal protection strategy, forming the first pair first, then oxidizing to form the second pair. Finally, the purity of the cyclic peptide is >95%, il-bonds tad-disulfide huma abbinati b'mod korrett, u l-attività hija vverifikata.
Każ 2: Il-proġett ta' peptide stejpjat ta' kumpanija farmaċewtika multinazzjonali
The customer wanted a stapled peptide with stabilized α-helix and 22 amino acids. We introduced olefinic amino acids into the solid-phase synthesis and completed the ring closure on the resin. The purity was >90% u l-helix kien 40% ogħla minn dak tal-peptide lineari, u l-peptide ġie introdott b'suċċess f'esperimenti fuq l-annimali.
Każ 3: Riċerka dwar it-tossini f'università nazzjonali
Il-klijent ried jagħmel Conotoxin li jkun fih tliet pari ta 'bonds disulfide, u talab lil diversi kumpaniji biex jagħmluha. Aħna fassalna mill-ġdid l-istrateġija ta 'protezzjoni, ftaħna u għaqqadna l-bonds tad-disulfide fi tliet passi, u kkonfermajna t-tqabbil korrett mill-MS/MS. Wara li l-klijent kiseb il-peptide, solvejna l-istruttura u ppubblikajna l-artiklu.
Titkellem dwar il-bżonnijiet tal-peptidi ċikliċi tiegħek?
Kemm jekk trid peptide ċikliku diffiċli għal esperimenti kritiċi, jew tridx ċiklizza peptide lineari biex ittejjeb il-mediċina, tista 'tkellem magħna. Jekk qed tfittex ix-Xjenza-Peptide biex tagħmel Cyclic Peptide Synthesis, għall-inqas m'għandekx għalfejn titfa' fuq il-ħofra mill-bidu.
Għandi bżonn li tgħidli:
Sekwenzi tal-peptidi (jew sekwenzi lineari)
Kif trid tiċċiklika (l-ewwel u l-aħħar/katina tal-ġenb/bond disulfide/peptide stejpjat)
Kemm għandek titlob (mg/g)
rekwiżiti ta’ purità
Meta tridu?
Agħtik valutazzjoni tal-fattibilità u kkwota fi żmien 24 siegħa.